回答1、菌种保藏的原理:菌种保藏有多种方法,其原理大多大同小异,主要是人为创造条件尽量降低生物体内的代谢活动,以达到延长生命、减少变异的目的,其中低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素。2、菌种保藏方法:菌种保藏常用的方法有冻干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷冻保藏法、传代培养保藏法、寄主保藏法、载体保藏法等。
一、菌种保藏的原理
1、菌种保藏的原理是根据菌种的生理生化特性,人为创造条件尽量降低生物体内的代谢活动,以达到延长生命、减少变异的目的。在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
2、低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,因此菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。其中低温可减缓机体细胞的酶活,降低新陈代谢,达到保藏菌种的目的,同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制。
二、菌种保藏方法
常用的方法有冻干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷冻保藏法、传代培养保藏法、寄主保藏法、载体保藏法等。
1、冻干保藏法
冻干保藏法是最有效的方法之一,具体为:先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥),其中真空冷冻干燥法最常见。
2、液氮保藏法
液氮保藏法,又称为超低温保藏法,主要利用微生物在低于-130°C的低温下新陈代谢趋于停止的原理,在液氮中(-196°C的超低温下)有效地进行菌种保藏的方法。该方法一般可保藏15年以上,是公认的菌种长期保藏技术之一。
3、甘油管冷冻保藏法
甘油管冷冻保藏法,利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。该方法适用于一般细菌的保存,同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种,适用范围广,操作简便,效果好,无变异现象发生。
4、传代培养保藏法
传代培养保藏法,又称定期移植保藏法,包括斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等,是指将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下培养,待菌种生长完全后,通常置于4℃-6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。
5、寄主保藏法
寄主保藏法相当于一般微生物的传代培养保藏法,必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,尚不能用于在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等。
6、载体保藏法
载体保藏法,将微生物吸附在适当的载体如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
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